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| 生物化学实验 → 实验指导 → 实验资源 | |||||||||
生物化学技术实验大纲及内容 一．
基本要求 生化学实验是生物化学课程重要的组成部分。通过实验要达到巩固生物化学基础知识、掌握生物化学基本技能并锻炼学生主动思考、分析问题、解决问题的能力，提高综合素质。 二．
项目总表 基础型（验证性）
26学时 1. 3，5-二硝基水杨酸比色定糖法
3学时
验证 选做 2. 粗脂肪的提取和定量测定
4学时
验证 必做 3. 蛋白质的性质
4学时
验证 必做 4. 氨基酸纸层析
4学时
验证 必做 5. 甲醛滴定法测定氨基氮
3学时
验证 选做 6. 人血清的醋酸纤维薄膜电泳
4学时
验证 选做 7. 酶的性质实验
4学时
验证 必做 提高型
97 学时 8. 酪蛋白的制备
4学时
综合 选做 9. 总氮量的测定-凯氏定氮法
6学时
综合 必做 10.
蛋白质含量的测定
9学时
综合 必做 11.
DNA的提取 4学时
综合
必做 12.
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
4学时
综合 必做 13.
离子交换柱层析分离核苷酸
26学时
综合 选做 14.
聚丙烯酰胺凝胶电泳
10学时
综合 必做 15.
维生素C的定量测定
4学时
综合 选做 16.
猪胰蛋白酶的纯化及活性测定
30学时
综合 选做 17.
自由基及其产物的测定
4学时
综合 必做
研究型
2-6周 1. 卵清蛋白提取、纯化、制备以及蛋白质分子量的测定
2-6周
综合
选作 2. 不同种子在不同的生长时期（干种子时期，萌动时期和幼苗生长时期）糖、蛋白质和脂肪含量的动态变化
2-6周
综合
选作 3. 酸性磷酸酯酶的动力学研究
2-6周
综合
选作 4. 酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究
2-6周
综合
选作 三．
实验内容 基础型（验证性）12学时
1. 3，5-二硝基水杨酸比色定糖法 内容: 还原糖与3,5-二硝基水杨酸作用生成橘红色化合物，利用比色法可以测定样品
中的含糖量。 目的: 学习还原糖的测定方法，掌握721分光光度计的使用。 要求: 通过实验掌握定性测定还原糖的方法。 所需要的仪器设备：电子天平、721分光光度计、试管。 耗材： 3，5-二硝基水杨酸，葡萄糖等。 2. 粗脂肪的提取和定量测定
内容：用索氏提取器提取脂肪并通过重量法测定脂肪含量。 目的：学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。 要求：熟悉
和掌握重量分析的基本操作，包括样品的处理、烘干、恒重等。 所需要的仪器设备：索氏提取器，烤箱，分析天平，托盘扭力天平，恒温水浴锅等。 耗材：溶剂（石油醚，乙醚）大豆粉等实验材料 3. 蛋白质的性质实验 内容：
双缩脲反应，茚三酮反应，黄色反应，考马斯亮蓝反应。蛋白质在等电点时易 聚积而沉淀，利用此性质可测定蛋白质等电点；蛋白质的盐析；重金属离子、 某些有机酸、有机溶剂等可能引起蛋白质沉淀。 目的：
了解某些氨基酸和蛋白质的成色原理，学习几种常见的鉴定蛋白质的方法。了 解蛋白质的两性解离性质并学习一种测定蛋白质等电点的方法；加深对蛋白质 胶体溶液稳定性的认识；了解蛋白质变性与沉淀的关系。 要求：
通过实验掌握几种蛋白质的鉴定方法。掌握一种测定蛋白质等电点的方法；掌 握蛋白质的盐析，沉淀的性质。 所需要的仪器设备：恒温水浴，试管和试管架。 耗材：
氨基酸和蛋白质溶液，硫酸铜，氢氧化钠，硝酸，茚三酮，考马斯亮蓝， 酪蛋白溶液，硫酸铵，醋酸钠，氨基酸，醋酸，硫酸铵，盐酸，碳酸钠， 硝酸银等。 4. 氨基酸的分离鉴定----纸层析
内容：将氨基酸溶液点样在滤纸上，在展层剂中展层，氨基酸因极性不同展层的速度不同，故可将氨基酸分开。 目的：加深对分配层析原理的认识。 要求：掌握纸层析的方法。 所需要的仪器设备：层析缸，分液漏斗，烘箱，喷雾器。 耗材：滤纸，氨基酸，茚三酮，异戊醇，醋酸。 5. 甲醛滴定法测定氨基氮 内容: 甲醛与氨基酸中的氨基结合，使氨基的滴定终点降至酚酞的指示范围之内。所 以氨基酸的含量可以用甲醛滴定法测定。 目的: 巩固氨基酸两性解离性质。 要求: 学会使用甲醛滴定法测定氨基酸含量。 所需要的仪器设备：
电子天平、碱式滴定管、三角瓶 耗材： 甲醛，氢氧化钠，酚酞指示剂 ，甘氨酸 6. 人血清的醋酸纤维薄膜电泳 内容: 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳。利用该方法对人血清 蛋白进行分离 目的: 学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一般原理。 要求:
通过实验掌握一种电泳的方法 所需要的仪器设备：
常压电泳仪、点样器、培养皿、玻璃板、醋酸纤维薄膜、 白瓷反应板 耗材： 血清，醋酸纤维薄膜，生化试剂 7. 酶的性质实验 内容： 温度和pH对酶活性的影响，激活剂和抑制剂对酶活性的影响；酶的专一性。 目的： 加深温度和pH对酶活性的影响认识。了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响； 进一步认识酶的专一性。 要求： 进一步认识影响酶活性的因素。认识激活剂和抑制剂对酶活性的影响及酶的专 一性。 所需要的仪器设备：水浴锅，试管及试管架，沸水浴 耗材： 淀粉，氯化钠，碘-碘化钾，磷酸氢二钠，磷酸氢二钾，蔗糖，蔗糖酶，氯化钠， 硫酸铜，硫酸钠。 提高型21学时 1. 酪蛋白的制备 内容:
利用等电点时蛋白质溶液易沉淀的性质将牛乳调到等电点
，再用乙醇洗涤 沉淀即得酪蛋白 目的: 学习从牛乳中制备酪蛋白的方法 要求:
掌握通过等电点从牛乳中制备酪蛋白的方法。 所需要的仪器设备：
离心机、电炉、抽滤装置
耗材：牛乳，乙醇，乙醚，醋酸，醋酸钠。 2. 凯氏定氮法测定蛋白质浓度
内容：样品处理，笑话，蒸馏，滴定，计算 目的：学习凯氏定氮法的原理和技术。 要求：掌握凯氏定氮法层定蛋白质含量的操作。 所需要的仪器设备：凯氏定氮蒸馏装置，微量酸式滴定管，电子天平
烘箱 电炉
耗材：常规化学试剂
大豆粉、市售面粉或其他实验材料。 3. 蛋白质含量的测定 内容:
双缩脲法测定蛋白质含量；紫外吸收法测定蛋白质含量；Folin-酚法测定蛋白 质含量；考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 目的: 学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。 要求: 学习并掌握几种测定蛋白质浓度的原理和方法。 所需要的仪器设备：紫外-可见分光光度计、721分光光度计、试管 耗材：
用紫外分光光度法测定蛋白质浓度。 4. DNA的提取
内容： 在浓氯花钠溶液当中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核酸的溶解度很小。在稀氯化钠溶液当中，正好相反。得到的核糖核蛋白用SDS处理可使DNA分离开， 氯仿--异戊醇可沉淀蛋白，用乙醇将DNA从上清中沉淀出，得到DNA。 目的:
染料法测定蛋白质浓度的原理加深对DNA性质的认识，学习DNA提取的方法。 要求：DNA提取的方法。 所需要的仪器设备：离心机，恒温水浴，匀浆器。 耗材： 动物肝脏，Tris，EDTA，氯化钠，氯仿-异戊醇，乙醇。 5. 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 内容:
酵母片中含有较多RNA。RNA可溶于稀碱溶液中，碱液被中和后RNA即析出，再加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中测出核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。 目的: 进一步认识RNA的性质，掌握RNA的提取方法。 要求:
学会酵母核糖核酸的分离及组分鉴定。 所需要的仪器设备：电子天平、离心机、恒温水浴锅、乳钵、布氏漏斗、抽滤器、 三角瓶 耗材：
NaOH
95%乙醇 浓盐酸
乙醚
氨水 硝酸银
三氯化铁 钼酸胺
抗坏血酸
苔黑酚 浓硫酸
6. 离子交换柱层析分离核苷酸 内容:
以酵母RNA为材料，将RNA用碱水解成单核苷酸，再用离子交换柱层析进行分
离，最后采用紫外吸收法进行鉴定。同时通过测定各单核苷酸的含量，可以计算出酵母RNA的碱基组成。
目的:
了解掌握RNA碱水解的原理和方法；掌握离子交换柱层析的分离原理和方法； 熟练掌握紫外吸收分析方法。 要求:
掌握离子交换柱层析对核苷酸的分离。 所需要的仪器设备：电子天平电泳仪、电泳槽、磁力搅拌器、离心机水、恒温水浴锅 耗材： 酵母片，强碱型阴离子交换树脂，甲酸，甲酸钠，KOH，过氯酸，NaOH，HCl，
AgNO3 7. 聚丙烯酰胺凝胶电泳
内容：用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳，分离蛋白质混合物。 目的：了解凝胶电泳的原理，学习凝胶电泳的操作。 要求：掌握凝胶电泳的操作方法。 所需要的仪器设备：电泳仪，电泳槽，磁力搅拌器，离心机。 耗材：蛋白质溶液，丙烯酰胺，甲叉双丙烯酰胺，Tris ,巯基乙醇，过硫酸铵，TEMED,盐酸 8. 维生素C的定量测定 内容:
总抗坏血酸包含还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，6-二硝基苯肼生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸的含量成正比，进行比色定量。 目的: 学习维生素C定量测定的原理和方法。 要求:
掌握生素C定量测定的原理和方法 所需要的仪器设备：恒温箱、紫外-可见分光光度计、捣碎机、烘箱 耗材： 抗怀血酸 其它生化试剂 9. 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定 内容： 胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的键具有高度的专一性。因此可利用含有这些键的酰胺或酯类化合物作为底物来测定胰蛋白酶的活力。 目的： 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法；
学习用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。 要求：掌握胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法；
掌握用紫外法测定酶活性，搞清酶活性与比活性的概念。 所需的仪器设备：食品加工机、研钵、高速分散器、大玻璃漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、恒温水浴、紫外分光光度计、秒表。 耗材： 乙酸，H2SO4，NaOH，硫酸铵，氯化钙 ，硼酸缓冲液，HCl， BAEE－
研究型2—6周（1-2选个）
1. 卵清蛋白提取、纯化、制备以及蛋白质分子量的测定
内容： 从鸡蛋中提取卵清蛋白并进行纯化、制备及蛋白质分子量的测定。这个实验包括盐析法提取卵清蛋白、冷冻法提纯卵清蛋白、透析法对卵清蛋白溶液脱盐、柱层析法纯化卵清蛋白、SDS-PAGE法对卵清蛋白分子量的测定及等电聚焦法测定等电点。 目的：巩固基础生物化学的知识，掌握蛋白质的提取、纯化、制备及测定，锻炼学生掌握现代生物化学技术及大型精密仪器的操作能力。 要求： 掌握卵清蛋白提取、纯化、制备以及蛋白质分子量的测定及现代生物化学技术及大型精密仪器的操作。 所需要的仪器设备： 电子天平、磁力搅拌器、高速冷的离心机、冰箱、电炉、冷冻干燥器、紫外-可见分光光度计、柱层析、蠕动泵、紫外检测仪、电泳仪、电泳槽、酸度计、多用电泳仪、表面电极、冷循环系统、聚光灯、自动生化分析仪、紫外扫描仪。 2. 不同种子在不同的生长时期（干种子时期，萌动时期和幼苗生长时期）糖、蛋白质和脂肪含量的动态变化 内容：测定不同的实验材料，如玉米种子、小麦种子、糜子、大豆等在不同的生长时期（干种子时期，萌动时期和幼苗生长时期）糖、蛋白质和脂肪含量的动态变化。 要求：巩固基础生物化学的基础知识，学会对不同实验材料在不同生长时期进行生理生化指标的测定。 目的：掌握对植物材料生理生化指标的测定。 所需的仪器设备：电子天平、索氏提取器、凯氏定氮蒸馏装置、721分光光度计、水浴锅 3. 酸性磷酸酯酶的动力学研究i
内容：包括酶的提取、纯化及酶活力测定；酶促反应进程曲线的制作和初速度的测定； PH～活性曲线的制作和酸碱稳定性试验；温度～活性曲线的制作和热稳定性试验；米氏常数（Km）和最大反应速度（Vm）的测定；酶的分子量测定。 目的：在基础型实验中学生已经掌握了酶的性质实验，通过这一实验学生基本掌握了有关酶的提取、纯化以及酶动力学方面的研究。 要求：掌握酶的动力学研究方法。 所需的仪器设备：电子天平、离心机、721分光光度计、恒温水浴锅、干燥箱、秒表、微量进样器。 耗材：酸性磷酸酯酶，其它化学试剂 4. 酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究 内容：本实验共有九个分实验：蔗糖酶的提取与部分纯化；离子交换柱层析纯化蔗糖酶；蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定；反应时间对产物形成的影响；pH对酶活性的影响和最适pH的测定；温度对酶活性的影响和反应活化能的测定；底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数Km和最大反应速度Vm的测定；尿素（脲）抑制蔗糖酶的实验；棉子糖和果糖抑制蔗糖酶的实验 目的：本实验为学生提供一个较全面的实践机会，学习如何提取纯化、分析鉴定一种酶，并对这种酶的性质，尤其是动力学性质作初步的研究。 要求：掌握酶的动力学研究方法。 所需要的仪器设备：研钵、恒温水浴、高速冷冻离心层析柱、部分收集器、磁力搅拌器机、真空泵与抽滤瓶、电导率仪、721分光光度计、恒温水浴锅、干燥箱、秒表、微量进样器
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